Этапы оттаивания спермы КРС

Технологии замораживания семени за последние годы очень продвинулись - замороженная спермопродукция крупного рогатого скота после разморозки совсем не отличается от «свежей». Но, чтобы добиться такого результата, семя сначала необходимо правильно оттаять.

Оттаивание спермы, замороженной в соломинках

При работе с замороженной спермопродукцией необходимо строго придерживаться правила - нельзя допускать преждевременного размораживания семени и замораживать его повторно.

Для того, чтобы оттаять семя потребуется специальный оттаиватель или водяная баня, а также термометр, анатомический пинцет длиной 25-30 см, таймер или часы с секундной стрелкой, термо-пенал, шприц для искусственного осеменения. После тщательной очистки рук и рабочей поверхности, все вышеперечисленное необходимо расположить поблизости, в частности, оттаиватель должен находиться рядом с сосудом Дьюара. Нужная температура в оттаивателе или водяной бане составляет +35…+37°С. Необходимо открыть крышку сосуда Дьюара и найти нужную соломинку. Извлекать соломинку только для получения информации не стоит. Найти необходимую соломинку без риска размораживания семени позволяет работа с упаковочным листом. Канистру с семенем важно держать ниже горлышка сосуда Дьюара, что предотвратит частичное размораживание других находящихся в канистре спермодоз. При поиске нужной соломинки, канистру поднимают максимум на 5 секунд. Если попытку требуется повторить, то нужен перерыв - опустить канистру на место на 15 секунд. Соломинку достают не больше трех за один раз - из сосуда Дьюара специальным пинцетом, предварительно погрузив пинцет в жидкий азот для охлаждения. Важно сделать операцию очень быстро и сразу опустить соломинку в оттаиватель. Продержать семя в оттаивателе с температурой +35..+37°С в течение 30 секунд, контролируя время с помощью таймера. Далее достать соломинку из оттаивателя, тщательно вытереть ее чистой сухой салфеткой, так как вода опасна для семени. Необходимо поместить соломинку с размороженной спермодозой в предварительно нагретый до температуры +35...+37°С шприц для искусственного осеменения. Для нагревания шприца используют термо-пенал. Затем надеть на шприц защитный чехол. В период между разморозкой спермы и осеменением нельзя допускать резких температурных перепадов во внешней среде, поэтому заправленный шпиц вплоть до момента использования держат в термо-пенале. С момента оттаивания температура семени в соломинке должна оставаться на том же уровне или повышаться. Осеменение проводится в сжатые сроки. Максимальное время до осеменения для размороженной обычной спермы составляет 10 минут, для сексированной 5 минут.

Оттаивание спермы, замороженной в открытых гранулах

Для оттаивания спермы, замороженной в открытых гранулах необходимы стерильные стеклянные флаконы объемом 10 мл, раствор лимоннокислого натрия, расфасованный в ампулы по 1 мл, водяная баня или специальные оттаиватели, спиртовый термометр до +50°С, а также стерильный анатомический пинцет длиной 25-30 см и стерильные марлевые салфетки. Кроме этого, необходим микроскоп с нагревательным столиком, чистые предметные и покровные стекла, штатив.

Перед началом работы дезинфицируют спиртовыми тампонами поверхность стола и раскладывают на нем стерильный инструмент. В водяную баню или оттаиватель помещают необходимое количество флаконов или ампул с 1 куб.см 2,9%-ного раствора лимоннокислого натрия, а на нагревательный столик микроскопа кладут чистые предметные и покровные стекла. После того как температура водяной бани или оттаивателя достигнет рабочего диапазона +38…+40°С, открывают крышку сосуда Дьюара, охлаждают погружением в жидкий азот бранши пинцета, быстро подтягивают к верхней трети горловины сосуда канистру со спермой, извлекают одну гранулу и быстро переносят во флакон или ампулу с 1 куб. см 2,9%-ного раствора лимоннокислого натрия. Время от извлечения гранулы из жидкого азота до переноса в водяную баню составляет не более 5 сек, а время оттаивания гранулы в оттаивателе 8-10 сек. Во время оттаивания флакон или ампулу осторожно покачивают, не доставая из водяной бани, до появления тонкого стержня льда в грануле. После оттаивания спермы флакон или ампулу со спермой сразу вынимают из водяной бани или оттаивателя, протирают насухо и ставят в штатив. Температура в помещении пункта должна быть не ниже +18..+20°С.

На предметное стекло, лежащее на нагревательном столике микроскопа, имеющем температуру +38…+40°С, стеклянной палочкой или пипеткой наносят каплю оттаянной спермы из флакона или ампулы, накрывают покровным стеклом и оценивают. Качество оттаянной спермы определяют под микроскопом по подвижности сперматозоидов. При положительной оценке ее помещают в инструмент для осеменения. Оттаянную сперму используют в течение 10-15 минут. Нельзя оттаивать гранулы при комнатной температуре или в одном флаконе более одной гранулы, а также оставлять оттаянную сперму в водяной бане или оттаивателе.

Необлицованные гранулы замороженной спермы должны быть правильной округлой формы объемом 0,2 куб.см. Гранулы объемом менее 0,2 куб.см или имеющие сколы, а также половинки и осколки гранул должны быть выбракованы, о чем составляют соответствующий акт и высылают рекламацию в организацию, предоставляющую семя для искусственного осеменения.

Источник: «АПК Эксперт. Животноводство. Птицеводство»